数据以mean±SD表示(n=3)，无共同字母的数据差异有统计学意义(P<0.05)。SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；T-AOC：总抗氧化能力。

2、日粮中免疫抗体对肠道免疫相关基因表达的作用

由图1可见，草鱼肠道中锰超氧化物歧化酶（MnSOD）、促炎细胞因子（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素8（IL8）、白细胞介素10（IL10）和转化生长因子β（TGF-β）的表【biǎo】达水平。MnSOD各组无显著差异（图1a）和IL8的表达水平（图1c）在所有【yǒu】组之间无显著差异（P>0.05），但M3的表达水平在所有组中最高。TNF-α的mRNA水平（图1d）在M3中达到峰值（P<0.05）。与其它组相比，M3组IL-1β的表达水平（图1b）显著上调（P<0.05）。随着添加量增加，IL10和TGF-β在草鱼肠道中的表达均先降低，然后缓慢增加，在M3组中达到最【zuì】低表达水平。IL10的表达水平（图1e）和TGF-β（图1f）在M3组中的表达水平与其它组相比显著下【xià】调（P<0.05）。图1（g–k）显示嗜水气单胞菌攻击后，所有组的肠中IL-1β、IL8、TNF-α、IL10和TGF-α的mRNA水平。与对照组相比，添加抗菌肽组M0-Ah中IL-1β的表达【dá】水平显著增加（P<0.05）。与M0-M2相比，M3、M4和M5IL8（图1h）和TNF-α（图1i）的表达有显著下调趋势（P<0.05）。IL10的mRNA水平没有显著差异（图1j）在所有组之间（除M1-Ah外【wài】）（P>0.05）。草【cǎo】鱼肠道中，TGF-β的表达水平（图1k）在M3-Ah达到峰值，与其他组相比有显著差异（P<0.05）。

图1.饲喂【wèi】AMP (a-e)和攻毒嗜水单胞菌(g-k)后草鱼肠道免疫相关基因的表达结果针对β-肌动蛋白归一化。数据以mean±SD表示(n = 3)。

3、肠道微生物区系的优势细菌类群

3.1 肠道菌群的多样性和丰富性

各组Shannon、Simpson、Chao和Ace指数没有显著差异（图2a-d），而在Shannon指数中，NC组和M5-Ah与M0-Ah相【xiàng】比，显著增【zēng】加（图2e）；在Ace指数（图2g）和Chao（图2h）指数中，与NC组相比，M2-Ah、M3-Ah和M4-Ah显著降低。β多样性分析的【de】结果可以反映物种组成在不同类群中的分布。因此，不同样【yàng】本中微生物群落的相似性或差【chà】异性可以使用主坐标分析（PCoA）来识别，这是β多样性分析之一【yī】（图2ij）。结果（图2i）显示，在从M0中分离出来的所有添加抗菌肽组（M3除外）中都有一些相似的组成，图2j显示了M1至M5-Ah中比M0和NC组更多的重叠元素。

图2.各组肠道菌群的多样性和丰富性

图3.通过单因素方差分析相对六组肠道菌群的相对丰度

(a):门水平;(b):各组植物菌的相对丰【fēng】度;(c): M0和M1的相对丰度;(d) M0和M2的相对丰度;(c): M0和M3的相对丰度;(d): M0和M4的相【xiàng】对丰度;(e): M0和M5的相对丰度。

图4.通过单因素方差分析相对嗜水单胞杆菌攻毒组肠道菌群的相对丰度

(a):门水平;(b): NC和M0-Ah的相对丰度;(c): NC和M1-Ah的相对丰【fēng】度;(d) NC和M2-Ah的相对丰度;(e): NC和M3-Ah的相对丰度;(f): NC和M4-Ah的相对丰度;(g): NC和M5-Ah的相对丰度【dù】;(h): M0-Ah和M1-Ah的相对丰度;(i): M0-Ah和M2-Ah的相对丰度;(j) M0-Ah和M3-Ah的相对丰度;(k): M0-Ah和M4-Ah的相对丰度;(l): M0-Ah和M5-Ah的相对丰度。

3.4 肠道菌群组成与免疫相关基因的相关性研究

如图5所示，螺旋体门和异常球菌-栖热菌门的相对丰度与IL-1β、MnSOD和TNF-α的表达水平呈显著正相关（P<0.05），而蓝藻门和硝化螺旋菌门分别与IL10和IL-1β的表达水平呈明显正相关（P<0.05）。此外，变形菌门和异常球菌-栖热菌门的相对丰度与IL8的mRNA表达水平之间存在显著的正相关关系（P<0.05）。图5b显示，梭【suō】杆菌和衣原体的相对丰度与IL-1β的mRNA表达水平呈显著正相关（P<0.05），但是，与酸杆菌和软壁菌门呈显著负相关（P<0.05），髌骨细菌门与IL8呈负相关。

图5.免疫防御系统相关基因与培养组(a)和攻毒组(b)肠道微生物相对丰度在门水平上的相关性Pearson相关系数由不【bú】同颜色体现(青色黑【hēi】色:正相关;紫色:负相关)。

本研究表明，在饲料中添加400~800 mg/kg的抗菌肽可以改善草鱼肠道结构，增加草鱼肠道菌群的多样性。此外，抗菌肽还能抑制某些致病【bìng】菌，如嗜水气单胞菌，增加厌氧菌数【shù】量，提高肠道对营养物质的吸收能力。但极高的剂量会抑制肠道消化、营养吸收能力和微生物多样性。抗菌肽已被应用于水产养殖以增强健康，但其与水生生物肠道菌群的相互作用还有待进一步探索。